傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過(guò)度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

HGECs人牙齦上皮細(xì)胞永生化

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿(mǎn)至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無(wú)菌，且須在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來(lái)源于不同動(dòng)物種類(lèi)、組織類(lèi)型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用?？筛鶕?jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過(guò)短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過(guò)小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過(guò)大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過(guò)程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人生發(fā)基質(zhì)細(xì)胞HHGMC 小鼠Ⅳ型膠原α1(COL4α1)ELISA試劑盒 Synaptogyrin 2： 神經(jīng)細(xì)胞囊泡循環(huán)蛋白2抗體 HCT/Taxol 人結(jié)腸癌耐藥

Gibco 10639011 STEM PRO-34- COMBO 500ml 小鼠Ⅳ型膠原(COL4)ELISA試劑盒 Synaptogyrin 3： 神經(jīng)細(xì)胞囊泡循環(huán)蛋白3抗體 CL-0051CaES-17(人食管癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

Saos-2(人骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA試劑盒 Synaptogyrin 4： 神經(jīng)細(xì)胞囊泡循環(huán)蛋白4抗體 人肝細(xì)胞 (HH) (1×106 )

兔晶體上皮細(xì)胞永生系;N/N1003A(RLE) 小鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA 試劑盒 Synaptojanin 2： 0酸肌醇0酸酶蛋白INPP5H抗體 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(來(lái)自NIH3T3);PA12 小鼠肺血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL

CD86 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD86 / B7-2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢP)ELISA試劑盒 Synaptojanin： 0酸肌醇0酸酶蛋白INPP5G抗體 敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21

CST7 Others Mouse 小鼠 Cystatin 7 / CST7 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 大鼠2(IGF-2)ELISA試劑盒 RSV IgM 合胞病毒 IgM(間接法二步法)

MEIS1： 同源盒蛋白Meis1抗體 人喉癌上皮細(xì)胞;Hep-2

NRK-52E大鼠腎細(xì)胞 In NRK-52E rat kidney cells DMEM培養(yǎng)基+5%FBS 大鼠2(IGF2)ELISA試劑盒 ECV IgG 艾柯病毒 IgG(間接法二步法)

MAOA： 單氧化酶A抗體 IL7R Others Human 人 IL7Rα / CD127 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

角膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) 大鼠2(IGF-2)ELISA 試劑盒 ECV IgM 艾柯病毒 IgM(間接法二步法)

HGECs人牙齦上皮細(xì)胞永生化U-2 OS細(xì)胞，人骨肉瘤細(xì)胞 黃綠青霉 人正常細(xì)胞;Hs 578Bst 人結(jié)腸癌抗原(CCA)ELISA 試劑盒 CaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha) 鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)蛋白激酶2α抗原 0.5mg

H-2Dd： I類(lèi)組織相容性H-2抗原D-Dalpha鏈抗體 HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/duck/Laos/3295/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0922 人窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA 試劑盒 Camk1g(Calcium/calmodulin dependent protein kinase IG) 鈣/鈣調(diào)蛋白依賴(lài)蛋白激酶IG抗原 0.5mg

HEATR5A： HEAT重復(fù)內(nèi)含蛋白5A蛋白抗體 人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞;HEH2

HIC(人小腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠神經(jīng)干細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) 人胚胎，皮膚，肌肉;M-22 人角質(zhì)素(KS)ELISA 試劑盒 TGF- Beta1 (Ttansforming Growth Factor – Beta1) 轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β1(抗原) 0.5mg